توضیحات
کیت Tissue Genomic DNA Extraction محصولی تخصصی از شرکت پارس توس است که برای استخراج و خالصسازی سریع و دقیق DNA ژنومی از انواع بافتهای حیوانی طراحی شده است. این کیت با بهرهگیری از ترکیب مؤثر Proteinase K و نمکهای کائوتروپیک، سلولها را بهصورت کامل لیز کرده و پروتئینها را تجزیه میکند تا در نهایت DNA با خلوص و کیفیت بالا برای آزمایشهای مولکولی حساس در اختیار پژوهشگر قرار گیرد.
پروتکل این کیت بر پایهی فناوری ستونی (Spin Column) طراحی شده است، که ضمن حذف مراحل وقتگیر و پیچیده، فرایند استخراج را بسیار ساده، سریع و کاربرپسند میسازد. به کمک این فناوری، میتوان در زمانی کمتر از یک ساعت، DNA خالص و فاقد آلودگی را از بافتهای مختلف بهدست آورد.
میزان نمونه مورد نیاز
مقدار بافت مورد استفاده بسته به نوع نمونه متفاوت است:
-
بافتهای نرم (مانند کبد، طحال): حدود ۱۰ میلیگرم
-
بافتهای سفتتر (مانند ماهیچه یا بافت چربی): حدود ۲۰ میلیگرم
در صورت استفاده از بافتهای سخت مانند استخوان، پیش از استخراج باید مرحلهی دکلسیفیکاسیون (Decalcification) انجام شود تا حذف یونهای کلسیم موجب تسهیل لیز بافت و افزایش بازده استخراج DNA شود.
ویژگیهای اصلی کیت Tissue Genomic DNA Extraction
-
مناسب برای استخراج DNA ژنومی از انواع بافتهای حیوانی از جمله کبد، کلیه، مغز، طحال و سایر بافتها
-
عدم نیاز به مراحل تهنشینی یا سانتریفیوژهای سنگین
-
سرعت بالا: استخراج کامل DNA در کمتر از ۴۵ دقیقه
-
تولید DNA با کیفیت بالا و عاری از آلودگی پروتئینی یا RNA
-
DNA استخراجشده کاملاً سازگار با آنزیمهای محدودکننده و قابل استفاده در تمام کاربردهای پاییندستی
-
قابل استفاده در PCR، qPCR، تعیین توالی و کلونسازی ژنی
اجزای موجود در بسته
این کیت شامل تمامی مواد و ابزار مورد نیاز برای استخراج DNA از بافت است:
-
PL (Lysis Buffer): بافر لیز سلولی برای شکستن غشاء سلول و هسته
-
Proteinase K (Lyophilized Powder) + PK Solution: آنزیم تجزیهکننده پروتئینها
-
PTB (Tissue Binding Buffer): بافر اتصال DNA به ستون سیلیکا
-
PW1 (Wash Buffer 1): بافر شستشوی اولیه برای حذف آلودگیهای سلولی
-
PW2 (Wash Buffer 2): بافر نهایی جهت دستیابی به DNA بسیار خالص
-
PE (Elution Buffer): محلول آزادسازی DNA از ستون
-
Spin Columns: ستونهای سیلیکا برای جداسازی و نگهداری DNA
-
Collection Tubes: لولههای جمعآوری DNA
شرایط نگهداری
این کیت دارای دو بخش با شرایط نگهداری متفاوت است:
-
بخش فریزری: پودر و محلول Proteinase K باید در دمای °C –20 نگهداری شود.
-
بخش دمای محیط: سایر بافرها و ستونها در دمای اتاق و به دور از نور مستقیم آفتاب نگهداری شوند.
نکات پیش از استفاده
-
پیش از شروع، اتانول مطلق (Absolute Ethanol) را آماده کنید تا در مراحل شستشو قابل استفاده باشد.
-
برای نمونههای استخوانی، انجام مرحلهی دکلسیفیکاسیون الزامی است.
-
برای حفظ تمامیت DNA، بهتر است مراحل استخراج بدون تأخیر انجام شود.
مراحل کلی کار
-
توزین ۱۰ تا ۲۰ میلیگرم از بافت مورد نظر
-
افزودن Lysis Buffer (PL) و آنزیم Proteinase K و انکوبه کردن تا تجزیه کامل بافت
-
افزودن Binding Buffer (PTB) و انتقال محلول به ستون سیلیکا
-
شستشو با PW1 و سپس PW2 جهت حذف آلودگیها
-
افزودن Elution Buffer (PE) و جمعآوری DNA خالص در لوله استریل
کاربردهای DNA استخراجشده
DNA بهدستآمده از این کیت دارای خلوص بالا و کاملاً مناسب برای کاربردهای پیشرفته در زیستمولکولی است، از جمله:
-
PCR و qPCR
-
ژنوتایپینگ و آنالیز ژنتیکی
-
کلونسازی و مهندسی ژنتیک
-
توالییابی DNA
-
مطالعات ژنتیکی بیماریها و مقایسه بین گونهها
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.