کیت Tissue Genomic DNA Extraction

توضیحات

کیت Tissue Genomic DNA Extraction محصولی تخصصی از شرکت پارس توس است که برای استخراج و خالص‌سازی سریع و دقیق DNA ژنومی از انواع بافت‌های حیوانی طراحی شده است. این کیت با بهره‌گیری از ترکیب مؤثر Proteinase K و نمک‌های کائوتروپیک، سلول‌ها را به‌صورت کامل لیز کرده و پروتئین‌ها را تجزیه می‌کند تا در نهایت DNA با خلوص و کیفیت بالا برای آزمایش‌های مولکولی حساس در اختیار پژوهشگر قرار گیرد.

پروتکل این کیت بر پایه‌ی فناوری ستونی (Spin Column) طراحی شده است، که ضمن حذف مراحل وقت‌گیر و پیچیده، فرایند استخراج را بسیار ساده، سریع و کاربرپسند می‌سازد. به کمک این فناوری، می‌توان در زمانی کمتر از یک ساعت، DNA خالص و فاقد آلودگی را از بافت‌های مختلف به‌دست آورد.

میزان نمونه مورد نیاز

مقدار بافت مورد استفاده بسته به نوع نمونه متفاوت است:

• بافت‌های نرم (مانند کبد، طحال): حدود ۱۰ میلی‌گرم

• بافت‌های سفت‌تر (مانند ماهیچه یا بافت چربی): حدود ۲۰ میلی‌گرم

در صورت استفاده از بافت‌های سخت مانند استخوان، پیش از استخراج باید مرحله‌ی دکلسیفیکاسیون (Decalcification) انجام شود تا حذف یون‌های کلسیم موجب تسهیل لیز بافت و افزایش بازده استخراج DNA شود.

ویژگی‌های اصلی کیت Tissue Genomic DNA Extraction

• مناسب برای استخراج DNA ژنومی از انواع بافت‌های حیوانی از جمله کبد، کلیه، مغز، طحال و سایر بافت‌ها

• عدم نیاز به مراحل ته‌نشینی یا سانتریفیوژهای سنگین

• سرعت بالا: استخراج کامل DNA در کمتر از ۴۵ دقیقه

• تولید DNA با کیفیت بالا و عاری از آلودگی پروتئینی یا RNA

• DNA استخراج‌شده کاملاً سازگار با آنزیم‌های محدودکننده و قابل استفاده در تمام کاربردهای پایین‌دستی

• قابل استفاده در PCR، qPCR، تعیین توالی و کلون‌سازی ژنی

اجزای موجود در بسته

این کیت شامل تمامی مواد و ابزار مورد نیاز برای استخراج DNA از بافت است:

• PL (Lysis Buffer): بافر لیز سلولی برای شکستن غشاء سلول و هسته

• Proteinase K (Lyophilized Powder) + PK Solution: آنزیم تجزیه‌کننده پروتئین‌ها

• PTB (Tissue Binding Buffer): بافر اتصال DNA به ستون سیلیکا

• PW1 (Wash Buffer 1): بافر شستشوی اولیه برای حذف آلودگی‌های سلولی

• PW2 (Wash Buffer 2): بافر نهایی جهت دستیابی به DNA بسیار خالص

• PE (Elution Buffer): محلول آزادسازی DNA از ستون

• Spin Columns: ستون‌های سیلیکا برای جداسازی و نگهداری DNA

• Collection Tubes: لوله‌های جمع‌آوری DNA

شرایط نگهداری

این کیت دارای دو بخش با شرایط نگهداری متفاوت است:

• بخش فریزری: پودر و محلول Proteinase K باید در دمای °C –20 نگهداری شود.

• بخش دمای محیط: سایر بافرها و ستون‌ها در دمای اتاق و به دور از نور مستقیم آفتاب نگهداری شوند.

نکات پیش از استفاده

• پیش از شروع، اتانول مطلق (Absolute Ethanol) را آماده کنید تا در مراحل شستشو قابل استفاده باشد.

• برای نمونه‌های استخوانی، انجام مرحله‌ی دکلسیفیکاسیون الزامی است.

• برای حفظ تمامیت DNA، بهتر است مراحل استخراج بدون تأخیر انجام شود.

مراحل کلی کار

1. توزین ۱۰ تا ۲۰ میلی‌گرم از بافت مورد نظر

2. افزودن Lysis Buffer (PL) و آنزیم Proteinase K و انکوبه کردن تا تجزیه کامل بافت

3. افزودن Binding Buffer (PTB) و انتقال محلول به ستون سیلیکا

4. شستشو با PW1 و سپس PW2 جهت حذف آلودگی‌ها

5. افزودن Elution Buffer (PE) و جمع‌آوری DNA خالص در لوله استریل

کاربردهای DNA استخراج‌شده

DNA به‌دست‌آمده از این کیت دارای خلوص بالا و کاملاً مناسب برای کاربردهای پیشرفته در زیست‌مولکولی است، از جمله:

• PCR و qPCR

• ژنوتایپینگ و آنالیز ژنتیکی

• کلون‌سازی و مهندسی ژنتیک

• توالی‌یابی DNA

• مطالعات ژنتیکی بیماری‌ها و مقایسه بین گونه‌ها